mAMPK调控线粒体功能参与鹅肥肝的形成

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摘要：旨在探究单磷酸腺苷激活蛋白激酶（AMPK），特别是线粒体AMPK（mAMPK）与鹅肥肝形成的关系。本研究选取了12只70日龄健康朗德鹅公鹅，并随机均分为自由采食对照组（正常肝组）和填饲组（肥肝组）用于活体试验。利用免疫印迹和免疫荧光技术检测鹅肝细胞中AMPKα的主要亚型、亚细胞分布以及鹅肥肝与正常肝全细胞和线粒体中AMPKαl的含量;通过高浓度葡萄糖和棕榈酸处理鹅原代肝细胞，利用免疫印迹技术检测对照组、100mmol⋅L-1 葡萄糖组和 0.5mmol⋅L-1 棕榈酸组细胞中AMPKαl的含量;在AMLl2细胞中过表达靶向线粒体的AMPK 竞争性抑制多肽（mitochondrial AMPK inhibitor peptide，mitoAIP），利用免疫印迹技术检测空载对照组和mitoAIP过表达组细胞中AMPK下游蛋白的含量;在AML12细胞中过表达mitoAIP并处理 2mmol⋅L-1 5-氨基咪唑-4-甲酰胺-1 ⋅β -D-呋喃核糖苷（5-aminoimidazole-4-carboxamide1- ⋅{β -D-ribofuranoside，AICAR），利用免疫印迹技术检测空载对照组、AICAR + 空载对照组、AICAR + mitoAIP过表达组细胞中AMPK下游蛋白的含量；在AML12细胞中过表达mitoAIP，利用流式细胞术检测空载对照组和mitoAIP过表达组细胞中的线粒体膜电位；在AML12细胞中过表达mitoAIP和MitoTimer，利用流式细胞术检测pMitoTimer + 空载对照组和pMitoTimer + mitoAIP过表达组细胞中线粒体的氧化应激水平；在AML12细胞中过表达mitoAIP并进行油酸处理，利用油红O染色分析油酸十空载对照组和油酸 + mitoAIP过表达组细胞中的脂肪沉积情况。（剩余34325字）