犬黑皮质素受体-4突变体D298N真核表达载体的构建及其在MDCK细胞中的表达

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摘要 ［目的］引进犬MC4R突变点，构建突变体D298N表达载体并在MDCK细胞中获得表达。［方法］设计带突变点D298N引物，以犬MC4R基因组DNA为模板，采用普通PCR和Overlap-PCR扩增编码区，将产物克隆、酶切、测序鉴定。将测序正确的基因连接到pcDNA3.1-myc-His/A载体上，将重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D298N酶切、鉴定，将测序正确的重组体转染到MDCK细胞中，继续培养3 d，提取细胞总RNA，并采用RT-PCR方法检测基因表达。（剩余9237字）