虾类十足目虹彩病毒1（DIV1）LAMP-HNB快检方法的建立

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摘要 ［目的］建立一种操作简便、快速、可视化的虾类病原检测方法，实现基层养殖户自检。［方法］针对十足目虹彩病毒1（DIV1），设计环介导等温扩增（LAMP）特异性引物，对反应试剂用量、温度、反应时间等条件进行优化，建立LAMP与羟基萘酚蓝（HNB）结合的LAMP-HNB可视化快速检测方法。［结果］在LAMP反应体系中添加12 mmol/L Mg2+和250 μmol/L HNB，65 ℃恒温条件下反应60 min最佳；DIV1病原质粒最低检出限为102 copies/μL，稳定性和特异性较好，通过带有靶标基因的阳性质粒进行16次重复性试验结果均较为稳定，多种模板扩增试验均未发生假阳性情况，符合试验要求。（剩余7883字）