柑橘黄龙病PCR检测技术优化

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摘 要：为提高Jagoueix等建立的柑橘黄龙病PCR检测体系的检测效率和检出率，本研究对基因组DNA提取、PCR体系和PCR程序进行优化，分析了不同萃取次数、裂解温度和抗氧剂组合对总DNA质量的影响，并设置不同引物浓度梯度和退火温度梯度，研究其对检测效果的影响。结果表明，萃取次数对DNA质量基本无影响；水浴65 ℃裂解比常温裂解提取的DNA质量更优，但总体差别不大；DNA提取液中添加β-巯基乙醇、β-巯基乙醇和PVP或者二者均不加入，对最终的基因组DNA的质量和纯度影响不大；引物浓度为0.4～1.0 μmol/L出现稳定特征条带，引物浓度为0.1 μmol/L时仍会产生引物二聚体；在66.5 ℃退火温度下的检测结果最优。（剩余10691字）