西伯利亚鲟MHC Ⅱ β 克隆、原核表达和多克隆抗体制备

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摘要： 旨在构建西伯利亚鲟（ Acipenser baerii）MHC Ⅱ β 基因原核表达载体高效表达，并进行多克隆抗体的制备。根据GenBank西伯利亚鲟 MHC Ⅱ β 基因序列设计引物，并加上6-His标签和酶切位点，从西伯利亚鲟脾脏细胞中克隆可读编码框（不含信号肽）部分，克隆并测序鉴定后构建Pet30α-MHCⅡβ质粒，转化至大肠杆菌BL21（DE3），异丙基硫代半乳糖苷 IPTG诱导表达，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、免疫印迹（Western Blot）鉴定，诱导表达的融合蛋白大小约为32 ku，能够与His抗体结合，融合蛋白主要以包涵体形式存在，在温度37 ℃时  1 mmol/L  的IPTG诱导4 h可以达到最佳表达量。（剩余9796字）

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