猪流行性腹泻病毒S1蛋白的原核表达及其核酸适配体的筛选

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摘 要：

本文旨在可溶性原核表达猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）S1蛋白的C端结合域（S1-CTD），并利用指数富集的配体系统进化技术筛选靶向S1-CTD蛋白的DNA适配体，为该病毒治疗药物的开发以及检测方法的建立奠定基础。采用大肠杆菌原核表达系统，将PEDV-S1-CTD质粒与带有麦芽糖结合蛋白（MBP）、小分子泛素样修饰蛋白（SUMO）、反转录终止因子（NusA）、谷胱甘肽巯基转移酶（GST）四种促溶标签的原核表达载体pET21b连接，构建重组质粒pET21b-MBP-S1、pET21b-SUMO-S1、pET21b-NusA-S1、pET21b-GST-S1，将双酶切鉴定和测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21进行诱导表达，选择可溶性好且表达量高的rMBP-S1重组蛋白进行后续试验，Western blot结果显示该重组蛋白正确表达，间接免疫荧光试验（IFA）结果表明rMBP-S1能与细胞表面受体结合。（剩余19797字）