口蹄疫病毒Asia1型猪源中和抗体的筛选与抗原表位鉴定

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摘 要： Asia1型口蹄疫病毒（FMDV）仍然在我国周边国家存在，对我国畜牧业造成长期威胁。本研究旨在利用单个B细胞抗体技术研制Asia1型FMDV的中和性单克隆抗体，以此为工具，鉴定Asia1型FMDV的保护性抗原位点。以FMDV Asia1/JS/05为诱饵抗原，通过流式细胞术分选免疫猪PBMCs中的抗原特异性B细胞，通过巢式PCR扩增单个B细胞IgG抗体重链与轻链可变区基因序列，分别构建IgG抗体重链与轻链表达质粒，将其共转染CHO-S细胞进行抗体表达；通过间接ELISA、间接免疫荧光试验（IFA）、病毒中和试验（VNT）验证抗体反应性和中和活性，利用免疫印迹、中和抗体逃逸突变株筛选鉴定中和抗体所识别的抗原表位类型和抗原表位关键氨基酸。（剩余18047字）