鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析

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摘 要： 为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒，同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位，分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA，通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因，构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1（+）为真核表达载体，构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven；将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞，利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达；以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化，间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。（剩余23432字）