利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创建水稻OsPUX2突变体

打开文本图片集

摘要 ［目的］U-box蛋白是一类决定靶标蛋白特异性的E3泛素连接酶（少部分属于泛素链聚集因子-E4），在植物抗病、抗逆和生长发育各阶段都发挥着重要作用。为揭示U-box蛋白家族基因OsPUX2在水稻防御反应中的具体生物学功能，利用CRISPR/Cas9编辑技术对OsPUX2基因进行编辑。［方法］在OsPUX2第1外显子设计1个20 bp的编辑靶点，构建了OsPUX2基因敲除载体pRGEB32-OsPUX2-gRNA载体，并通过农杆菌介导的转化方法侵染水稻Pik-H4 NIL愈伤组织，经潮霉素检测获得转基因阳性植株，并对T0代转基因植株进行靶点区域序列进行PCR和测序分析，分析ospux2的突变类型。（剩余9691字）