基于CRISPR-Cas9 技术建立CSE1L 基因敲除C2C12 细胞

打开文本图片集

摘要：为研究染色体分离样蛋白1（chromosomesegregation 1-like，CSE1L）在小鼠骨骼肌发育中的作用，利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建CSE1L 基因敲除的C2C12细胞系。针对小鼠 CSE1L 的第3外显子设计3组sgRNA，构建sgRNA表达质粒（连接绿色荧光蛋白，green fluorescent protein，GFP）和Cas9质粒（连接红色荧光蛋白，red fluorescent protein，RFP）共转染C2C12 细胞，筛选高切割效率的sgRNA；将转染该sgRNA 和Cas9 的C2C12细胞进行流式细胞分选，获取共表达红、绿双色荧光蛋白的细胞，并用DNA测序进行鉴定。（剩余14937字）