罗氏沼虾野田村病毒和十足目虹彩病毒1二重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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摘要：【目的】建立能同时检测罗氏沼虾野田村病毒（MrNV）和十足目虹彩病毒1（DIV1）的二重荧光定量PCR，为罗氏沼虾白尾病（WTD）及虹彩病毒病（DIV1D）的临床诊断和疫情监测提供更简便和高效的检测方法。【方法】分别根据MrNV-CP基因和DIV1-MCP基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针，将目的基因片段分别克隆至pGM-T载体上制备重组质粒（pGM-T-CPMrNV和pGM-T-MCPDIV1），其中，pGM-T-CPMrNV用Sal I酶切后经体外转录获得MrNV标准品RNA，pGM-T-MCPDIV1则直接作为DIV1标准品DNA;以标准品为模板进行反应条件优化及标准曲线制定，建立可同时检测MrNV和DIV1的二重荧光定量PCR，并对该方法进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验。（剩余22240字）