利用CRISPR/Cas9技术制备BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系

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摘 要： 旨在利用CRISPR/Cas9系统构建BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系（bovine mammary epithelial cells， bMECs），同时检测BLG基因敲除后对细胞的影响。本研究利用体外切割试验筛选获得靶向牛的BLG基因的第一外显子序列的3条sgRNA，与CRISPR/Cas9表达载体电转染入 bMECs，利用浓度为1.8 μg·mL-1嘌呤霉素和6 μg·mL-1稻瘟菌素双药筛和PCR分析鉴定获得BLG基因编辑的单克隆细胞株；利用Western blot（WB）验证细胞BLG表达；绘制生长曲线和CCK-8试验检测BLG基因敲除对bMECs细胞增殖的影响；同时根据sgRNA序列，对基因组上潜在脱靶位点进行PCR测序分析。（剩余18781字）