hPP10-Cu，Zn-SOD融合蛋白的制备、穿膜效应及其抗氧化、抗炎症功效

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摘要：目的 探究人源性细胞膜穿透肽hPP10携带人源性抗氧化蛋白Cu，Zn-SOD的穿膜效应并观察其抗氧化、抗炎功效。方法利用RT-PCR技术扩增人源性SOD基因片段、酶切连接法构建重组质粒pET15b-Cu，Zn-SOD，pET15b-hPP10-Cu，Zn-SOD；利用镍柱亲和层析法、分子筛方法纯化Cu，Zn-SOD、hPP10-Cu，Zn-SOD融合蛋白并利用Western blotting法鉴定其正确性；利用免疫荧光法、荧光共定位实验、Western blotting法鉴定hPP10-Cu，Zn-SOD在细胞中的穿膜效应；利用Western blotting法鉴定hPP10-Cu，Zn-SOD融合蛋白穿膜时间梯度和浓度梯度效应；利用SOD酶活性测定试剂盒检测hPP10-Cu，Zn-SOD穿膜后的SOD酶活性；利用MTT法检测hPP10对细胞活性的影响。（剩余17012字）