猪肺炎支原体解螺旋酶RuvA的原核表达、多克隆抗体制备及活性鉴定

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摘 要： 猪肺炎支原体的持续性感染问题频发，同源重组介导的抗原变异扮演重要角色。解螺旋酶RuvA调节霍利迪连接体变构是参与同源重组的关键步骤。鉴于此，本研究旨在原核表达猪肺炎支原体解螺旋酶RuvA重组蛋白，鉴定其DNA结合活性并制备多克隆抗体。试验通过分子克隆构建原核表达质粒pET21a-RuvA，经诱导表达和纯化获得RuvAMhp重组蛋白；免疫家兔制备抗RuvAMhp多克隆抗体，再利用间接ELISA和Western blot试验进行效价测定和特异性验证；利用凝胶迁移试验结合表面等离子共振技术分析RuvAMhp的DNA结合活性；利用凝胶迁移试验结合Western blot试验鉴定RuvAMhp的寡聚特性。（剩余18312字）