CRISPR/Cas9技术高效制备山羊SOCS2基因编辑胚胎

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摘 要： 旨在设计、筛选高效编辑山羊胚胎生长负调控因子SOCS2基因的sgRNA，为通过SOCS2基因编辑创制快长型山羊奠定技术基础。本研究利用在线网站对山羊SOCS2基因SH2结构域保守序列设计2条sgRNA，构建表达载体，体外转录获得sgRNA及Cas9 mRNA；体外检测sgRNA+Cas9蛋白切割靶DNA的效率；在此基础上将屠宰场山羊卵巢分离培养的442个孤雌胚胎进行分组，2个试验组显微注射sgRNA和Cas9 mRNA混合物，对照组注射超纯水，以单个囊胚全基因组DNA扩增产物为模板，PCR扩增靶区域并测序鉴定，发生编辑的样本进行T-A克隆测序检测编辑形式；根据在线网站预测，每条sgRNA选择5个错配数最少的潜在脱靶位点进行脱靶检测。（剩余19693字）