CA-NHEJ系统对大肠杆菌链霉素耐药基因rpsL的编辑效率及其耐药性研究

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摘要：以控制质粒拷贝数的pcnB基因与链霉素耐药性rpsL基因为靶标基因，研究CA-NHEJ系统对大肠杆菌的基因编辑效率，及rpsL相关基因与链霉素耐药性的关系。通过CA-NHEJ系统成功实现了对大肠杆菌MG1655的pcnB和rpsL基因编辑，其中，pcnB基因编辑效率达100%，rpsL基因仅有1个克隆缺失第22～24位3个氨基酸，其他4个克隆未编辑成功但具有链霉素抗性；进一步利用CA-HR系统敲除大肠杆菌MG1655的rpsL基因CCTGCGCTG序列（第22～24位氨基酸），编辑效率达100%，验证了CA-HR的高效性，抗性鉴定表明，该序列是影响链霉素抗性的关键序列，是一个未曾报道的新突变；对于未编辑成功但具有链霉素抗性的4个克隆进行基因测序及比对，找出了rhsC和gadB等6个可能与链霉素抗性相关的其他基因。（剩余6257字）