基于牛结节性皮肤病病毒ORF61基因荧光定量检测方法的建立

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摘 要:基于国内流行的牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)的基因组序列,建立了靶向ORF61基因的MGB探针荧光定量PCR检测方法。本研究基于LSDV基因序列设计出带有MGB探针的特异性荧光定量PCR引物,并进行特异性和灵敏性筛选验证。最终,筛选得到靶向于LSDV ORF61基因的一对qPCR引物;利用pCAGGS-ORF61真核表达质粒,获得标准曲线y=-3.2875x+47.87,线性相关系数R2=0.9986,扩增效率达101%;荧光定量PCR特异性试验、重复性试验和灵敏性试验结果表明,该引物的特异性高、重复性良好和灵敏度高等优点;该引物的最低检测限为6.71拷贝·μL-1,各批次内与批次间重复性结果的变异系数均小于2%。(剩余14687字)