质粒CRISPR/Cas9系统在马口鱼精原干细胞系基因编辑中的应用

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摘要：【目的】检测质粒CRISPR/Cas9系统在马口鱼精原干细胞（ObSSCs）和斑马鱼胚胎中的基因编辑效果，为开展基因编辑的SSCs移植提供技术支撑，进而推动养殖鱼类基因编辑育种工作的快速发展。【方法】将靶向红色荧光蛋白（RFP）的gRNA整合至可用于体内外基因编辑的整合质粒pCas9-zU6sgRNA（带有支架序列的向导RNA，由来自斑马鱼的U6启动子驱动）和报告质粒pCVpf-gRNA（向导RNA）中，然后分别转染ObSSCs和显微注射斑马鱼胚胎，通过荧光显微镜观察和PCR检测质粒CRISPR/Cas9系统在ObSSCs及斑马鱼胚胎中的基因编辑效果。（剩余25576字）