脂肪干细胞外泌体传递miR-145调控增生性瘢痕成纤维细胞生物学特性的实验研究

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[摘要]目的：探究脂肪干细胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）来源的外泌体（Exosome，Exo）传递miR-145对增生性瘢痕成纤维细胞（hypertrophic scar fibroblasts，HSF）生物学功能的影响。方法：从增生性瘢痕组织中分离培养HSF细胞，从脂肪组织中分离培养ADSCs，流式细胞术检测其表面标记物表达情况；采用含miR-145过表达慢病毒及阴性对照miR-NC慢病毒感染ADSCs，实时荧光定量PCR测定转染效果，并提取各转染组ADSCs上清液中Exo，获得含miR-145过表达的ADSCs来源Exo，利用透射电镜观察其形态、纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径分布以及Western blot检测表面标志性蛋白CD63、CD81、CD9和TSG101的表达情况对提取的外泌体进行鉴定；添加外泌体培养HSF细胞，具体分组包括对照组、Exo组、miR-NC-Exo组、miR-145-Exo组，PKH26荧光标记的ADSC来源的Exos与HSF细胞培养，共聚焦荧光显微镜观察外泌体能否被细胞摄取，EdU检测各组HSF细胞的增殖能力，Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组HSF细胞的凋亡水平，Western blot检测各组细胞内凋亡相关蛋白（cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2）及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原（COL-Ⅰ、COL-Ⅲ）的蛋白表达水平。（剩余15272字）