多粘类芽孢杆菌中L-阿拉伯糖异构酶的克隆表达及固定化研究

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摘要： 为了对D-半乳糖进行异构化制备D-塔格糖，从多粘类芽孢杆菌KF-1中克隆L-阿拉伯糖异构酶基因，并在大肠杆菌BL21（DE3）细胞中表达； 重组蛋白PpoLAI通过镍柱纯化，并利用壳聚糖微球进行固定化研究。结果表明： 使用D-半乳糖作为底物时，PpoLAI的最佳温度和pH分别为50 ℃、 7.0； Mn2+显著激活酶活性，当Mn2+的浓度为0.8 mmol/L时，PpoLAI的活性最高；以D-半乳糖为底物的PpoLAI的米氏常数和分别为161.4 mmol/L及98.84 μmol/（mg·min）；PpoLAI的最优固定化条件为壳聚糖的质量分数为3%，戊二醛的体积分数为3%，游离酶添加量为0.9 mg/g，吸附温度为25 ℃，吸附时间为4 h，PpoLAI的固定化率为80.12%，固定化的PpoLAI的热稳定性、 pH稳定性与游离酶相比有显著提升。（剩余13090字）