抗菌肽 Cathelicidin-1真核表达及发酵液抑菌活性鉴定

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摘要:为了获得体外表达的高活性抗菌肽,通过分子克隆技术构建了抗菌肽 Cathelicidin-1重组载体,在毕赤酵母(Pichiapastoris) GS115中表达,并鉴定包含该抗菌肽的发酵液的抑菌活性。通过 DNA 全合成技术合成编码抗菌肽 Cathelicidin-1的全长基因,采用 PCR 技术扩增靶标基因并与真核表达载体pGAPZαA 连接,获得重组质粒pGAPZαA- Cathelicidin-1;将重组质粒转化至大肠杆菌 DH5α中扩增,提取质粒并经单酶切处理后转化毕赤酵母 GS115;使用 YPD 培养基培养酵母,72h 后收集发酵液,通过 Tricine-SDS-PAGE 检测抗菌肽表达,并通过抑菌圈与抑菌曲线测定鉴定发酵液的抑菌活性。(剩余10057字)