牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用

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摘 要： 为建立一种检测牛冠状病毒（BCoV）的抗体间接ELISA检测方法，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白，并作为包被抗原，建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法，应用于临床样品检测。结果显示，S1蛋白大小约100 ku，可表达于昆虫High5细胞培养基上清，经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好；经反应条件优化，确定抗原包被浓度为0.125 μg·mL-1，血清稀释度为1∶200；采用1%明胶，于37 ℃封闭3 h；血清样品于37 ℃孵育30 min；酶标二抗的稀释度1∶25 000，37 ℃孵育45 min；37 ℃避光显色13 min；临界值为0.297；经检验，该方法特异性良好；批间及批内变异系数均小于10％。（剩余20517字）