毒害艾美耳球虫疫苗ENYS株TaqMan qPCR检测方法的建立靳浩展

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摘 要：为了对E. necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测， 该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序， 结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术。结果显示， En⁃marker5测序结果与预期相符， 最优的引物浓度和探针浓度分别为500 nM和250 nM， 标准曲线的斜率为-3.249， 相关系数为0.999， 可以通过Ct值对模板浓度定量， 该方法检测下线为290个拷贝/反应和50个卵囊/反应， 灵敏度是传统PCR的10倍；该方法可以特异性检测EnYS株， 不能扩增其他种的疫苗株和野毒株以及肠道病原菌；重复性检测的变异系数小于0.6%， 重复性良好。（剩余12604字）