牛蒡子苷调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进肝细胞脂噬作用机制

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摘要：目的以游离脂肪酸（FFA）诱导的HepG2细胞脂质堆积为细胞模型，探讨牛蒡子苷改善肝脏脂质蓄积的作用机制。方法MTT法检测牛蒡子苷对HepG2细胞活性的影响；设立正常对照组，模型组，阳性药洛伐他汀组（ 10μmol⋅L-1， ，雷帕霉素组（ 100nmol⋅L-1 ），牛蒡子苷低、中、高剂量组 （10，20，30μmol⋅L-1） ，自噬抑制剂氯喹组 （10μmol⋅L-1） ；采用油红O染色检测细胞内脂滴形成情况；试剂盒检测细胞中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）水平；激光共聚焦显微镜观察荧光标记的微管相关蛋白轻链3（LC3）与脂滴以及溶酶体标志物的共定位；蛋白免疫印迹法（Westem Blot）检测LC3、溶酶体关联膜蛋白2（LAMP2）、泛素结合蛋白 p62（p62/ SQSTM1）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化（p）-PI3K、蛋白激酶B（Akt）、 p-Akt 、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白0 ΩmTOR ）、 蛋白表达情况；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测自噬相关蛋白5（ATG5）、自噬相关蛋白7（ATG7）、自噬相关蛋白12（ATG12）、LAMP2及脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）和激素敏感性脂肪酶（HSL）的mRNA表达情况。（剩余20667字）