GraSR 通过MurC 促进金黄色葡萄球菌中等耐受万古霉素的作用研究

打开文本图片集

【摘 要】目的：探讨GraS（T136I）突变对万古霉素中等耐受金黄色葡萄球菌（vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus，VISA）耐药性的影响及机制。方法：采用同源重组技术将XN108（VISA）的GraS（T136I）突变位点引入到Newman（VSSA）构建突变菌株Newman-GraS（T136I），利用相同的方法在XN108中将突变位点进行回复，构建回复菌株XN108-GraS（I136T），利用E-test法测定各菌株对万古霉素的耐药性，通过透射电子显微镜观察各菌株细胞壁厚度，采用RT-qPCR检测了金葡菌细胞壁肽聚糖合成相关基因在XN108及其突变回复菌株XN108-GraS（I136T）中的表达水平变化，通过LacZ报告系统检测XN108和XN108-GraS（I136T）中murC 基因启动子活性，通过结合位点分析和凝胶迁移阻滞实验（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）证实GraSR对murC 基因的调控作用。（剩余11337字）